細胞工廠培養(yǎng)細胞的時候需要用到各種溶液,如培養(yǎng)基、緩沖液等,其中胰酶也是非常重要的一種溶液。雖然每種細胞的培養(yǎng)條件各不相同,但是,在細胞傳代過程中都少不了這個步驟—胰酶消化。那么,在使用胰酶消化細胞的時候,我們應該注意什么呢?
胰酶是一種蛋白酶,酶切位點是肽鏈的Lys或Arg兩個殘基的羧基端肽鏈,通過在特定位置上降解蛋白,使細胞膜上與培養(yǎng)皿壁結合處蛋白降解,從而使兩者分離。這時,細胞由于自身內(nèi)部細胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力可成為球形。
胰酶適用于消化細胞間質(zhì)較少的軟組織和傳代細胞,如胚胎、上皮、肝、腎等組織,但對纖維性組織和較硬的癌組織效果較差。胰酶的消化效果主要與pH值、溫度、胰酶濃度、組織塊大小和硬度有關。
在使用胰酶消化細胞工廠中的細胞時,我們一定要控制要消化時間,一般肉眼觀察貼壁細胞層,只要能移動了,多半呈沙狀移動就可以了,就應該停止消化。此外,如果使用了胰酶,細胞還是成團,可能是消化時間不夠、胰酶的消化濃度不夠、細胞密度過高或者使用了過期胰酶。
綜上所述,使用胰酶消化細胞工廠中的細胞時需要注意控制消化時間,使用前觀察胰酶是否過期,避免因為胰酶過期影響細胞生長狀態(tài)。
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