細(xì)胞培養(yǎng)瓶多用于貼壁細(xì)胞的培養(yǎng),不同于懸浮細(xì)胞在培養(yǎng)基中生長,貼壁細(xì)胞需要貼附在容器的表面生長,所以進(jìn)行收獲或者傳代的時(shí)候要先將細(xì)胞消化下來。消化細(xì)胞的方法有多種,常見的主要是以下幾種:
1、酶消化法
這也是我們?nèi)粘V惺褂帽容^多的一種方法,一般使用胰酶消化,濃度在0.25%-0.5%之間,消化時(shí)間根據(jù)細(xì)胞種類、操作手法、溫度等因素而不同。消化完之后,需要用血清或者含血清的培養(yǎng)基終止消化。
2、物理法
不借助胰酶,直接吹打或用細(xì)胞刮刀將細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面的細(xì)胞消化下來,對于貼壁很牢的細(xì)胞可以使用這種方法。但要注意,吹打和刮刀都會(huì)給細(xì)胞造成一定的損傷,一般不建議使用這種方法。
3、冷凍法
利用細(xì)胞冷凍后收縮的原理,讓細(xì)胞在從培養(yǎng)瓶上脫落。這種方法對細(xì)胞的損傷小,適用于貼壁不是特別緊,又特別嬌氣的細(xì)胞。如間充質(zhì)干細(xì)胞、DC細(xì)胞等。
4、離子螯合劑
不破壞細(xì)胞表面分子,僅與CAMs螯合。一般使用EDTA比較多,濃度在0.02%左右。作用于細(xì)胞與間質(zhì),對細(xì)胞間也有一定作用。注意,它能顯著影響pH值,而且在弱堿性條件下才易溶。因此,配制時(shí)應(yīng)調(diào)節(jié)好酸堿度。它不能被終和。因此,消化下來的細(xì)胞要洗一遍。
以上就是消化細(xì)胞培養(yǎng)瓶中細(xì)胞常用的幾種方法,綜合來看,酶消化法是應(yīng)用較多的一種。當(dāng)然也要根據(jù)細(xì)胞的種類及特性,選擇合適的消化方法。